B16细胞小鼠黑色素瘤细胞

1） 来源：蒂科生物细胞库

2） 形态：贴壁 上皮样和纺锤形混合

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

6） 运输：顺丰发货

培养条件：

培养基：DMEM(H)+10%FBS（推荐HAKATA货号:HN-FBS-500）

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

传代：

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:2到1:4；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（diyi次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zuijia消化时间，记录zuijia消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。

冻存：

建议使用本公司无血清细胞冻存液货号：H-W-100，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。

保存条件：液氮存储

温馨提示：（常见问题，处理方式）

T25瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：diyi次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

热销细胞：

H031 NCI-H1299 人非小细胞肺癌细胞 RPMI1640+10%FBS 贴壁 上皮细胞样

H032 PANC-1 人胰腺癌细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H033 RBE 人肝胆管癌细胞 DMEM+10%FBS 贴壁 上皮细胞样

H034 SAOS-2 人成骨肉瘤细胞 McCoy's 5A+15%FBS 贴壁 上皮细胞样

H035 SiHa 人子宫颈鳞癌细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H036 NB 4 急性早幼粒细胞白血病细胞 RPMI-1640+10% FBS 悬浮 圆形

H037 SPC-A-1 人肺腺癌细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H038 SW480 人结肠癌细胞 L-15+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H039 U-87MG 人脑星形胶质母细胞瘤细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H040 ZR-75-1 人乳腺癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H041 SW1116 人结肠腺癌细胞 L-15+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H042 293A 人胚肾细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H043 SGC-7901 人胃腺癌细胞 RPMI-1640 +10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H044 Ishikawa 人子宫内膜癌细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H045 Eca-109 人食管癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H046 RD-ES 人尤文氏肉瘤 RPMI-1640+15% FBS 贴壁 上皮细胞样

H047 NCI-H1437 人肺癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H048 HOS 人骨肉瘤细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H049 Hela S3 人宫颈癌细胞 F12K+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H050 ECC1 人宫颈内膜腺癌细胞 DMEM+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H051 SUP-B15 人Ph+急淋白血病细胞系 IMDM+20% FBS 悬浮 淋巴母细胞样

H052 TF-1 人血液白血病细胞 RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重组人GM-CSF 悬浮 淋巴母细胞样

H053 NCI-H446 人小细胞肺癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H054 GES-1 人胃正常黏膜上皮细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H055 IOSE80 人卵巢正常上皮细胞株 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H056 GIST882 人胃肠道间质瘤细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H057 KGN 人卵巢颗粒细胞癌 DMEM/F12(1:1)+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H058 U937 人组织细胞淋巴瘤细胞 RPMI-1640 +10% FBS 悬浮 单核细胞样

H059 SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化细胞 F12K+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H060 tpc-1 人乳头瘤状甲状腺癌细胞 F12K+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H061 hela-luci Luciferase稳定表达Hela细胞 DMEM(L)+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H062 colo320 人结肠癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 半悬浮 圆形

H063 bxpc-3 人胰腺腺癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H064 raji 人Burkitt's淋巴瘤细胞 RPMI-1640+10% FBS 悬浮 淋巴母细胞样

H065 5637 人膀胱癌细胞 RPMI-1640+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H066 chang-liver 人肝细胞(已被hela污染） DMEM(L)+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H067 a549-gfp gfp标记的A549细胞 F12K+10% FBS 贴壁 上皮细胞样

H068 hs578.t 人乳腺癌细胞 DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰岛素 贴壁 上皮细胞样

H069 T24 人膀胱移行细胞癌细胞 McCoy's 5A+15%FBS 贴壁 上皮细胞样

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