1、计算称量

根据待检样品属性计算出所需的不同培养基的体积，根据说明书进行准确称量；电子天平需开机预热30min后使用，称量过程中手要稳，避免将培养基洒落在天平称量盘中，若洒落，应立即停止称量，使用洁净布擦干粉末，重新调“0"后称量。

2、溶化

对于可溶性淀粉,先用少量冷水调成糊状,再放入沸水中；不易溶解的培养基，先加入少量纯化水振摇溶解后，二次加水配制；需分装的培养基，需溶解，含琼脂的培养基需加热融化，溶解后，分装至不同容器中进行灭菌。

3、分装

如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免引起杂菌污染。装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。

4、加塞

分装完毕后，需要用硅胶塞堵住管口或瓶口。主要目的是过滤空气，避免污染。不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。塞入管口或瓶口中的硅胶塞，应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿褶皱侵入，塞好后，以手提塞，管、瓶不下落为合适；硅胶塞的2/3应在管内，上端露出少许便于拔取。

5、包扎

塞好塞的试管和锥形瓶应盖上牛皮纸用绳扎紧，同时贴上标签，注明培养基的名称、组别、配制日期后，准备灭菌。

6、灭菌

根据培养基说明书规定的灭菌参数进行灭菌。灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。