使用缓冲液注意这些问题

1) 缓冲液使用前必须过滤。

2) 溶剂、样品易受到细菌和霉菌的影响，要注意清洁。

3)一般不能直接用有机溶剂做清洗冲洗。

4)梯度洗脱时，选低吸收值的缓冲液 ：

例如：梯度洗脱时，缓冲液与有机相应预混，以防止析盐。在保证峰不拖尾的情况下，尽可能选用低浓度的缓冲盐，防止析盐; 缓冲盐浓度，一般用20～30mM基本上就可以了，如果流动相中有机相含量高的话，流动相中的盐类缓冲液浓度就不能过高，盐的浓度起码要保证在流动相条件下不会析出。离子对缓冲液浓度要高一点，一般50～100mM。

缓冲液大量稀释后pH变化在什么范围内？

缓冲液大量稀释后pH只是比原来的溶液有很少的变化。因为稀释之后，会促进缓冲溶液加速水解，其ph值会因此得到补偿，而不会发生剧烈的变化。

由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定。这种溶液称为缓冲溶液。缓冲体系由：

1、弱酸和它的盐（如HAc---NaAc）

2、弱碱和它的盐（NH3·H2O---NH4Cl）

3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液组成。