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细胞传代培养小技巧
时间:2022-01-17      阅读:217
1.细胞生长至高密度时,即须分至新的培养瓶中,一般稀释比例为1:3至1:6,依细胞种类而异。
2.材料:
2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶): 以10ml分装于15ml无菌离心管中,保存于–20℃,使用前放在37℃ 水槽回温。2.3.新鲜培养基2.4.无菌吸管/离心管/培养瓶生
3.步骤:
3.1.附着型细胞(adherentcell)
3.1.1.吸掉旧培养液。
3.1.2.用D-PBS洗涤细胞一至二次。
3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用数分钟,于倒立显微镜下观察,当细胞将要分离而呈现圆粒状时,吸掉或者倾倒胰酶溶液。(若没有完全去除,则在胰酶作用后,加入适量含血清之新鲜培养基终止胰酶作用)
3.1.4.轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落,加入适量之新鲜培养基,以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。
3.2.悬浮型细胞(suspensioncell)
3.2.1.吸出细胞培养液,放入离心管中,离心1000rpm5-10分钟。
3.2.2.吸掉上清液,加入适量之新鲜培养基,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。
3.3.杂交瘤细胞
有些杂交瘤需培养三天以上才会产生抗体,若是更换培养基,则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基,直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大,可倾斜放置,或分至新培养瓶中。
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