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如何正确的操作细胞冻存?
更新时间:2021-11-29      阅读:1460

1.冷冻保存方法:

(1)传统方法:冷存管置于4C10分钟-->-20C30分钟-->-80C 16~ 18小时(或隔夜)-->液氮槽vaporphase长期储存。

-20C不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80C冰箱中,惟存活率稍微降低些。

(2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3C/分钟之速度由室温降至(-80C以下) -120C,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

(3)HAKATA无血清细胞冻存: 加入HAKATA无血清细胞冻存液制成悬液,直接冻于-80°C,可保存≥5年。

2.操作步骤:

(1)冷冻24-48小时更换半里或全里培养基,使细胞处于指数生长期。

(2)配制冷冻保存溶液(使用配制):另取离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚矾(DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。

(3)离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少里细胞悬浮液(约0.1m1)计数细胞浓度及冻存活率。

(4)取与细胞悬液等里的冻存液,缓慢逐商加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液( DMSO醉后浓度为5~ 10%),使细胞浓度为1~5x 10*cells/ml,混合均匀,分装于已标示*之冷冻保存管中,1~ 2nl/mal,并取.少里细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。


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